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酵母选择营养缺陷型培养基Yeast selective
点击次数:1128 发布时间:2017-12-15

酵母选择营养缺陷型培养基Yeast selective

本篇文章由专业生化试剂供应商索莱宝为您提供。

酵母选择性营养缺陷型培养基

一、选择性营养缺陷型酵母培养基SD培养基(Synthetic Dropout Media)SC-Droupout

酵母缺陷培养基种类:一缺培养基单缺培养基/二缺培养基双缺培养基/三缺培养基/四缺培养基/五缺培养基

(1)    一缺培养基:以SD-Ura(Sc-Ura培养基)为代表的此类酵母SC选择培养基或SD缺陷培养基主要用于单质粒酵母转化筛选

用途:外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化

SD/-Trp, SD/-Leu, SD/-His, SD/-Ura, SD/-Met, SD/-Ade

SC-Trp,SC-Leu, SC-His, SC-Ura, SC-Met, SC-Ade

(2)    二缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基用于双质粒酵母转化筛选

用途:外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统初始质粒转化

免疫共沉淀(Coimmunoprecipitation)、Y187和AH109 酵母交配实验、接合型二倍体筛选

SD/-Trp-Leu,SD/-Trp-His,SD/-Trp-Ade,SD/-Leu-Ade,SD/-His-Ade, SD/-Leu-His, SD/-Ura-Trp, SD/-Ura-Leu,SD/-Ura -His

SC-Trp-Leu, SC-Trp-His, SC-Trp-Ade, SC-Leu-Ade, SC-His-Ade, SC-Leu-His, SC-Ura-Trp, SC-Ura-Leu,SC -Ura-His

(3)    三缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基用于双质粒酵母转化筛选和报告基因检测

用途:外源基因在酵母中的表达、异源基因功能互补、酵母单杂交系统和酵母双杂交系统报告基因检测

Y187和AH109 酵母交配实验后报告基因分析(His3,Ade2)

SD/-Trp-Leu-His ,SD/-Trp-Leu-Ade, SD/-Ura-Trp-His, SD/-Ura-Leu-His,SD/-Trp-His-Ade, SD/-Ura-Trp-Leu

SC-Trp-Leu-His ,SC-Trp-Leu-Ade, SC-Ura-Trp-His, SC-Ura-Leu-His,SC-Trp-His-Ade, SC-Ura-Trp-Leu

(4)    四缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基主要用于报告基因分析

用途:酵母双杂交系统和酵母三杂交系统报告基因检测 Y187AH109 酵母交配实验后报告基因分析(His3Ade2)

SD/-Trp-Leu-His-Ade, SD/-Ura-Trp-Leu-His, SD/-Ura-Trp-Leu-Met

SC-Trp-Leu-His-Ade, SC-Ura-Trp-Leu-His, SC-Ura-Trp-Leu-Met

(5)    五缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基主要用于报告基因分析和表型分析

用途:酵母三杂交系统报告基因检测(His3Ade2)、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析

SD/-Trp-Leu-His-Ade-Met, SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade,SD/-Ura-Trp-Leu-His-Met,SD/-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

SD/-Ura-Leu-His-Ade-Met

SC-Trp-Leu-His-Ade-Met, SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade,SC-Ura-Trp-Leu-His-Met,SC-Ura-Trp-Leu-Ade-Met

SC-Ura-Leu-His-Ade-Met

(6)    六缺培养基:此类酵母SC选择培养基-SD培养基主要用于报告基因分析、表型分析和药物毒理分析

用途:酵母三杂交系统报告基因检测、酵母营养缺陷型分离鉴定和表型分析、药物毒理分析

SD/-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met, SC-Ura-Trp-Leu-His-Ade-Met

上述培养基称为选择性营养缺陷型酵母培养基,主要用于酵母质粒转化筛选,故又称为酵母选择培养基。

培养基配制方法注意事项:

1: 上述培养基含有各种所需成分(葡萄糖除外,因为有些研究者需要用其他糖类如用半乳糖诱导GAL1启动子表达),为各种氨基酸和酵母含氮碱/酵母氮源的精细混合物干粉,按照8g/L称取,加水后即可配制成相应的培养液, 无需再购置添加Minimal SD Base或其他酵母氮源成分。高压灭菌后加无菌葡萄糖至终浓度为2%(或棉子糖)或实验所需的特定诱导物(如半乳糖用于GAL1启动子诱导表达的剂量或浓度为2%)即可,适用于外源基因在酵母中的表达,酵母单杂交(yeast one-Hybrid)和酵母双杂交(yeast two-Hybrid)系统等的选择缺陷型培养,筛选含特定标志基因的酵母表型。

2: 在配制酵母缺陷培养基时,可以先加入葡萄糖后再高压,对酵母的生长不会产生严重影响。但如加入葡萄糖后再高压消毒则培养基会变色,由浅黄到深褐色不等,对细胞的生长还是有一定影响的(但在一般情况下不会影响实验)。FunGenome suggestion: 由于氨基酸和葡萄糖在高温高压下可起化学反应,因此技术部不建议将葡萄糖加入后高压,而建议用上述提示1的方法配制。

3: FunGenome suggestion : 棉子糖和半乳糖原则上是不能高温高压的,因为在高温高压下其化学结构会发生变化从而对诱导效果产生抑止,这一点特别提醒研究者务必注意,尤其是在做表达调节介导的功能互补实验时至关重要!

4:制备平皿即软琼脂半固体培养基(琼脂粉按2%即每100ml加2克琼脂粉)用于转化筛选时,高压前需要将pH调至6.0左右(为方便起见,pH范围可在5.6-6.5之间变化),而液体培养基则不需要调pH。

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