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CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒的实验要点
点击次数:259 发布时间:2018-08-24
   CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒的实验要点
  CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解。可以用于大批量样品的检测。
  实验要点:
  1.建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
  2.有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
  3.白细胞可能需要培养较长时间。
  4.当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
  5.如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
  6.如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

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